鱼脾脏淋巴细胞分离液试剂盒,BR

储存条件:RT，避光，有效期2年
单位:盒
规格:200ml/Kit,

本品用于分离鱼脾脏淋巴细胞。 本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。 

一、 脾脏组织单细胞悬液的制备方法

注：

A．全过程及所需试剂要求无菌环境。   

B．本试剂盒中不包含胶原酶，若采用酶消化法制备单细胞悬液，请用户根据各实验室要求另购不同类型胶原酶。

1. 剪碎法：将组织块放入平皿后，加入少量F液及20%胎牛血清；用眼科剪将组织剪至匀浆状，加入5mL F液及20%胎牛血清；用吸管吸取组织匀浆，用100目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内；离心沉淀1500转/分×3 min，再用细胞清洗液清洗3次，每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片，以200目不锈钢滤网（另购）过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×108~1×109个/mL的单细胞悬液备用。

2. 匀浆器法：用眼科剪将组织剪成小块；放入70mL组织研磨器内，加入2mLF液及20%胎牛血清；缓慢转动研棒，研磨至匀浆；用5mLF液及20%胎牛血清冲洗研器；收集细胞悬液，经200目不锈钢滤网（另购）过滤；离心沉淀800rpm×2min ，再用细胞清洗液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×108~1×109个/mL的单细胞悬液备用。

3. 酶消化法：    

 A．用F液将胶原酶稀释，终浓度为400 U/mL，至于冰浴备用。

 B．取一适当大小培养皿进行操作：用镊子夹碎动物脾脏，加入稀释后的胶原酶，37℃消化20分钟。

 C．以100或200目不锈钢滤网（另购）过滤，离心沉淀800prm×2min ，再用细胞清洗液洗3次，离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×108~1×109个/mL的单细胞悬液备用。

细胞计数方法:     细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。既可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。

 计数与计算过程 

1）在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。 

2）用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。

 3）置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。

 4）按下式计数细胞悬液的密度： 细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/mL×稀释倍数公式中乘以104 因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm3而 1mL＝1000mm3

细胞计数要点：  A．进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/mL，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团#10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数

注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。