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2023-03-06

1.所有冻干培养基、保护剂以及容器等均需高温高压灭菌。高压灭菌前,在试管内贴上印有培养物标识的纸标签。或者,使用带无菌帽的试管。
2.取一环分离后所得到的细菌菌液或者是甘油保存的菌液,在细菌培养板上分区或者使用蛇形划板(大肠杆菌在麦康凯平板上划板),37℃倒置培养并过夜。
3.取一只干净并且进行高温高压灭菌后的试管,倒入大约10ml的细菌培养液(大肠杆菌用磅培养液),从过夜培养后的培养平板中取一个单菌落至该培养液中后,在37℃温度条件下振荡培养过夜。
4.取10支清洗干净且进行灭菌处理后的西林瓶,每个西林瓶中加入 1ml的冻干保护剂,后加入过夜培养后的1ml 菌液,盖上无菌橡胶塞,备注:需要保留出气孔,并做好标记后,存放于-80℃冰箱冷冻存储。
5.细菌冻干机预热约30分钟后,迅速将已冷冻的菌液放在细菌冻干机上,打印几小时至十几小时不等细菌已冻干。
6.冻干后关闭冻干机,取出已经冻干好的细菌,压盖密封,存储在 -80℃条件下超低温冰箱保存,可存放数年。

冻干及存储过程需要的试剂:
常用冻干保护剂:10%脱脂奶粉,5%蔗糖,1%明胶,溶于纯水中。
冻干保护剂的作用:冻干保护剂是在在冻结和干燥过程中,可以防止活性组分发生变性。
填充剂:能防止有效组分随水蒸汽一起升华逸散,并使有效组分成形。
抗氧化剂:用作防止生物制品在冷冻干操过程以及储藏过程中发生氧化变质。
酸碱调整剂:在冷冻干澡过程和储藏过程中,能将生物制品的pH调整到活性物质的最稳定区域。
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