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2020-07-02

组织细胞样品:

1.新鲜组织经胰酶胶原酶等消化分散成单个细胞悬液,离心弃去上清液;

2.从4℃冰箱中取出ELS裂解液,按1:3-5的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml细胞压积加入3-5ml裂解液),轻轻吹打混匀;

3.800-1000rpm离心5-8分钟,离心弃去上层红色清液;

4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或无血清培养液离心洗2-3次;

5.如裂解不完全可重复步骤2和3;

6.重悬细胞,用于后续实验;如提取RNA,最好是于步骤4开始使用DEPC水配制的溶液中进行。

血细胞

1.新鲜抗凝血,离心弃去上清液;

2.取出4℃冰箱预冷ELS裂解液,按1:6-10的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml细胞压积加入6-10ml裂解液),轻轻吹打混匀;

3.800-1000rpm离心5-8分钟,离心弃去上层红色清液;

4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或无血清培养液离心洗2-3次;

5.如裂解不完全可重复步骤2和3;

6.重悬细胞,用于后续实验;如提取RNA,最好是于步骤4开始使用DEPC水配制的溶液进行。

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