小鼠骨髓中性粒细胞分离液试剂盒,BR

产品属性 Product Attributes

基本信息

英文名称： Mouse Bone Marrow Neutrophil Isolation Solution Kit
中文名称： 小鼠骨髓中性粒细胞分离液试剂盒
规格： 200ml/KIT
储存条件： 保存在常温(RT)，避光，2年。
运输条件： 常温运输

产品介绍 Product Introduction

保存：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期2年。无菌开封后，保存于室温。

试剂盒组成： 

试剂盒组分    规格： 

试剂A          200mL 

试剂C          100mL 

红细胞裂解液 100mL 

细胞洗涤液    200mL 

无菌硅化管   10mL*5只

操作步骤(仅供参考)： 

1、制备骨髓单细胞悬液。 

2、取一支无菌硅化离心管或15mL离心管，先加入4mL试剂A，再加入2mL试剂C，最后添加细胞悬液于试剂C之上，三者形成梯度界面，注意分离液与样本总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果。(为避免试剂混合，加样时可45°倾斜试管，使用巴氏吸管沿管壁缓慢滴加试剂。) 

3、室温，水平转子500~1000g，离心20~30min。(单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件可以自行摸索。) 

4、离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细胞为单个核细胞层，下层细胞为粒细胞层(个体差异或者是分离条件不同，粒细胞层可分离不明显)。 

5、吸取粒细胞层及其上下各0.5ml左右分离液至新的离心管中，加入10mL细胞洗涤液洗涤细胞。400g，离心10min。(若离心后的细胞沉淀有红细胞污染，可加入适量红细胞裂解液裂解5min。裂解完成后250g，离心5min。少量多次裂解，直至离心后细胞团块无明显污染。) 

6、弃上清,加入10mL细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。 

7、弃上清，重悬细胞备用。

骨髓单细胞悬液制备方法(仅供参考)：

小动物骨髓的采集：

1、处死动物，无菌提取股骨和胫骨，剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔（注意尽可能少的剪走骨髓腔）。 

2、取1ml的无菌注射器，使用全血及组织稀释液或者是含有血清的培养基，冲洗骨髓腔以获得骨髓。 

3、轻柔吹打混匀并收集骨髓液，建议使用70μm滤网过筛以祛除杂质，400g-500g，离心10min。 

4、全血及组织稀释液重悬细胞沉淀，调整细胞密度在2×10⁸~1×10⁹个/mL。

大动物骨髓的采集：

大动物骨髓的采集可采取活体穿刺方法：先将动物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮肤，然后估计好皮肤到骨髓的距离，把骨髓穿刺针的长度固定好。操作人员用左手把穿刺点周围的皮肤绷紧，右手将穿刺针在穿刺点垂直刺入，轻轻左右旋转将穿刺针钻入，当穿刺针进入骨髓腔时常有落空感。连接注射器缓慢抽吸骨髓组织，当注射器内抽到少许骨髓时即停止抽吸。用全血及组织稀释液或者是含有血清的培养基调整细胞浓度为2×10⁸–1×10⁹/ml的单细胞悬液备用。

常用骨髓穿刺点：

股骨：穿刺部位在股骨内侧面,靠下端的凹面处； 

胸骨：穿刺部位是胸骨体与胸骨柄连接处； 

肋骨：穿刺部位是第5～7肋骨各点的中点； 

胫骨：穿刺部位是股骨内侧、靠下端的凹面处。

穿刺结束后要用胶布封贴穿刺孔，防止发生气胸。

注意事项： 

A.本试剂盒所提供的无菌硅化离心管不建议重复利用，可用普通的15mL无菌离心管替代。 

B.开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。 

C.分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃)，如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层不清晰。 

D.待分离的组织要求新鲜，避免冷冻和冷藏。 

E.部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。

F.如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在制备单细胞悬液和分离过程中，

注意无菌操作，避免微生物污染。

注意事项 Considerations

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。