谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P.,BR

产品属性 Product Attributes

基本信息

中文名称: 谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P.
英文名称: Glutathione Sepharose H.P.
规格: 10ml
储存条件: 保存在2-8℃，1年。
运输条件: 冷藏运输

说明： 颗粒

产品介绍 Product Introduction

谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P.产品简介：

谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P.用于分离纯化谷胱甘肽S-转移酶（GST）标签蛋白、其它来源的谷胱甘肽S-转移酶以及和谷胱甘肽具有亲和作用的蛋白的亲和层析介质。pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。

谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P.产品参数

产品名称：谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P. (Glutathione Sepharose H.P.)

基质：6%琼脂糖凝胶

配基：肝素

颗粒大小：45-165μm

最大流速：600cm/h

工作pH：3-12

每毫升蛋白结合量：10mg

操作温度：室温

保存条件：贮存于4°C-28°C（保存溶液为20%乙醇）

谷胱甘肽-琼脂糖凝胶H.P.使用方法

谷胱甘肽树脂的处理:

1. 轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。

2. 取部分匀浆放入15mL聚丙烯管（每100mL 细菌培养物大约需要2mL 匀浆）。

3. 4℃ 500 g离心5分钟，小心去掉上清。

4. 在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500 g离心5分钟，小心去掉上清。

5. 每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。

制备细胞抽提物：

1. 每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。

2. 加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。

3. 用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100 强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5ug/mL, 4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。

纯化融合蛋白

1.细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。

2. 混合物于4℃以500 g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

3. 沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。

4. 4℃以500 g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

5. 结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa 因子切割，释放靶蛋白。

用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：

1. 沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。

2. 4℃以500 g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。

3. 重复步骤5和6两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：

4. 在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2-16小时。

5. 4℃以500 g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）

6. 10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。

试剂配制：谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl (pH8.0)   

备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。

注意事项 Considerations

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
3.实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。